Назначение: набор recomLine TORCH Screening IgM предназначен для качественного определения человеческих IgM-антител к токсоплазме (Toxoplasma gondii), вирусу краснухи, цитомегаловирусу (ЦМВ) и вирусу простого герпеса 1 и 2 типов (HSV-1/2) в образцах сыворотки или плазмы методом иммуноблота с целью скрининга.
Замечание: оценка результатов определения IgG- и IgM-антител методом иммуноблота должна проводиться комплексно.
Анализируемые антигены: в данном методе использованы антигены цельных лизатов клеток и дополнительных рекомбинантных антигенов - правило двух бэндов (всего восемь патоген-специфических антигенных бэндов на стрипе, по два для каждого патогена: лизатный и рекомбинантный).
Рекомбинантные антигены: для T. gondii - p30, для цитомегаловируса - gB2, для вируса краснухи – RU-co, для вируса простого герпеса gG2. Чувствительность: для токсоплазмы 100%, вируса краснухи 86.4, ЦМВ 100%.
Специфичность: для токсоплазмы 100%, вируса краснухи 96%, ЦМВ 100%, HSV-1/2 98.7%.
Приложения теста: токсоплазмоз вызывается инфекцией Toxoplasma gondii, протозойным паразитом, первичный хозяин которого – кошки. Половое размножение происходит только в организме первичного хозяина, что ведет к экскреции инфекционных ооцитов с экскрементами кошек - источником инфекции для людей. Так как T. gondii персистирует у свиней, коз, и других млекопитающих, люди также могут быть инфицированы при употреблении сырого или недостаточно термически обработанного мяса. Токсоплазмоз является наиболее частым паразитарным заболеванием в центральной Европе. Доминирование серотипа соответственно высокое в общей популяции и повышается с возрастом (на приблизительно 1% за год жизни). Однако могут наблюдаться значительные локальные отличия, от менее 10% (например, скандинавские страны) до почти 80% (например, Франция). Коэффициент заболеваемости врожденным токсоплазмозом в центральной Европе приблизительно 5 - 6 случаев на 1000 живых новорожденных. Течение заболевания у иммунокомпетентных людей, инфицированных T. Gondii, обычно бессимптомное, редко сопровождается неспецифическими гриппоподобными симптомами, такими как небольшая лихорадка, усталость, ломота и набухание лимфатических узлов. Первичная инфекция приводит к пожизненной персистенции паразита и пожизненному иммунитету к последующей инфекции токсоплазмой. Одно из тяжелых проявлений инфекции T. gondii у людей проявляется при контакте беременной женщины с паразитом и инфицировании плода (врожденный токсоплазмоз). К серьезным осложнениям врожденного токсоплазмоза относятся снижение зрения или слепота, задержка физического или умственного развития (энцефалит, сопровождающийся тяжелым неврологическим расстройством). Вероятность и тяжесть внутриутробной инфекции зависит от времени инфицирования во время беременности. Частота трансплацентарного заражения T. gondii повышается с увеличением срока беременности: установленная частота заражения составляет в 1-м триместре 14% по сравнению с 59% - в 3-м триместре. Частота тяжелых последствий и внутриутробной гибели плода, а также тяжести клинических признаков среди инфицированных детей снижается с увеличением срока гестации; установленная частота тяжелых последствий среди инфицированных детей составляет 41% при инфицировании в 1-м триместре по сравнению с почти 0% при инфицировании в 3-м триместре. Клинические предъявления врожденного токсоплазмоза колеблются от субклинически инфицированных детей до тяжелых последствий. Лекарственная терапия применяется, если подтверждена первичная инфекция во время беременности. При соответствующей терапии тяжесть показателей и отдаленных осложнений значительно снижается. Токсоплазмоз также является серьезной причиной заболеваемости и смертности среди больных с иммунодефицитами, включая пациентов после трансплантации костного мозга и других органов, больных СПИДом и лимфопролиферативными или другими гематологическими заболеваниями. Вирус краснухи относится к семейству тогавирусов рода рубивирусов, РНК-содержащий вирус, впервые был выделен Паркманом, Уэллером и Невой в 1962. Инфекция проявляется как краснуха (в недавнем прошлом одно из наиболее распространенных детских заболеваний).Вирус краснухи проникает в организм при вдыхании и инфицирует клетки респираторного тракта. В норме виремия происходит на 5-7 дни после контакта. Первичный контакт с вирусом включает иммунный ответ и приводит к долгосрочному иммунитету. Инфекция характеризуется неспецифическими гриппоподобными симптомами (небольшая лихорадка, головная боль, усталость, боль в горле) и приблизительно в 50% случаев сопровождается мелкопятнистой сыпью. Большое число постнатальных инфекций протекают бессимптомно; у детей около 40% и у взрослых до 60% краснуха протекает без появления характерной сыпи. Послеинфекционные осложнения иммунокомпетентных людей включают реактивный артрит суставов конечностей. Симптоматика артрита может персистировать у взрослых, особенно у женщин, до 3-х недель. Редко наблюдаются такие осложнения, как миокардит, неврит, отит и бронхит (эпизодически), а также краснушный энцефалит (очень редко). В развитых странах инфекция краснухи была успешно побеждена благодаря единым программам вакцинации детей. Тем не менее, краснуха не исчезла на сегодняшний день, и во многих развивающихся странах единая иммунизация против краснухи не проводится. Титр антител IgG к краснухе 10-15 МЕд/мл указывает на наличие защитного иммунитета. Однако, в редких случаях, несмотря на вакцинацию, дикие штаммы вируса краснухи могут вызвать инфекцию. Таки образом, все предполагаемые контакты с краснухой на ранних сроках беременности необходимо проверить. Первичная инфекция краснухой на первом триместре беременности представляет значительную клиническую проблему. Хотя внутриутробное заражение плода вирусом краснухи может произойти на любом сроке гестации, трансмиссия, произошедшая именно на этой стадии, ассоциирована с синдромом врожденной краснухи. Синдром врожденной краснухи характеризуется персистирующей инфекцией плода и может привести к множественным порокам развития и тяжелым последствиям для плода. Классические симптомы включают пороки сердечно-сосудистной системы, гепатоспленомегалию, слепоту и глухоту, задержку физического и умственного развития. 10-20% внутриутробно зараженных детей умирает на первом году жизни. Цитомегаловирус человека (ЦМВ, CMV) - это ДНК-содержащий вирус, принадлежащий семейству герпесвирусов. ЦМВ встречается у людей повсеместно. Этот пожизненно персистирующий вирус передается с биологическми жидкостями при прямом контакте слизистых (например, при половых контактах, кормлении грудью, инфицировании новорожденных в родовых путях), ятрогенной трансмиссии (например, при переливании крови или при трансплантации) или при внутриутробном заражении (врожденная инфекция). В общем случае первичная инфекция у иммунокомпетентных людей протекает асимптоматически или сопровождается неспецифическими гриппоподобными симптомами средней тяжести. Инкубационный период составляет от 4-х до 8-и недель. Вслед за первичной инфекцией ЦМВ переходит в скрытую форму. Латентный вирус может реактивироваться при иммуносупрессивных состояниях или под действием других стимулов, что может привести к вторичной инфекции ЦМВ (реактивации). Большое разнообразие кинических манифестаций зависит от возраста и состояния иммунной системы инфицированного. У лиц с иммунной недостаточностью, например, у больных после пересадки органов, больных СПИДом, пациентов со злокачественными заболеваниями, ЦМВ-инфекция может привести к тяжелым и опасным для жизни заболеваниям. Первичная инфекция, как и реактивация инфекции ЦМВ у беременных женщин, может привести к патологии плода. Риск тяжелых осложнений в случае первичной инфекции выше, чем при реактивации инфекции. Если сероконверсия происходит в период беременности, то заражение плода вирусом происходит в 40% случаев. До 15% зараженных детей при рождении имеют симптомы или страдают от различных пороков, таких как задержка физического и умственного развития, потеря слуха. Отдаленные по сроку проявления заболевания наблюдаются в 10-15% случаев у инфицированных детей. Вирус простого герпеса (HSV) является одним из наиболее широко распространенных патогенов человека в мире. Охарактеризовано 2 серотипа вируса простого герпеса: HSV 1 типа (HSV-1) и HSV 2 типа (HSV-2), с различными клиническими признаками. Инфекция HSV может происходить при прямом контакте с инфицированными секретами как симптоматических, так и бессимптомных носителей. При первичной инфекции вирус простого герпеса инфицирует эпителиальные клетки слизистой, в которых он реплицируется и может вызывать характерное воспаление с образованием пузырей. Для передачи вируса требуется прямой контакт с тканью или секретами, содержащими вирусные частицы. В поздней фазе инфекции вирус проникает в сенсорные нервы и ганглии, где он персистирует пожизненно (латентно). При благоприятных для вируса условиях, таких как УФ-излучение, стресс, гормональные эффекты, он может реактивироваться и вызвать вторичную инфекцию (рецидив). Так как вторичная инфекция может быть субклинической, бессимптомное распространение вируса является значительным источником трансмиссии вируса. Инфекция HSV-1 не защищает от заражения HSV-2. Два серотипа HSV обычно имеют различные предпочтительные области инфицирования, но в принципе они могут инфицировать любое место кожного покрова. В этом отношении HSV-1, в первую очередь, инфицирует область головы (язык, рот, губы, глотку и глаза). Типичное место поражения, вызываемое этим типом герпеса, губы. HSV-2, в основном, инфицирует область гениталий и анальную область, вызывая генитальный герпес. Некоторые редкие манифестации включают HSV-ассоциированный энцефалит и простой герпес роговицы. Одним из наиболее серьезных последствий генитального герпеса является неонатальный герпес (герпес новорожденных). Герпес новорожденных вызывается инфицированием новорожденного при рождении, обычно при контакте с инфицированными выделениями материнских половых органов. С HSV-2 связаны приблизительно 75% случаев и с HSV-1 25% герпеса новорожденных. Известны три формы герпеса новорожденных: 1) заболевание кожи, глаз и рта, 2) энцефалит 3) генерализованная инфекция. Без соответствующей терапии смертность среди нелеченых детей при диссеминированном развитии превышает 60%. Риск врожденной инфекции особенно высок при первичном материнском генитальном герпесе, в особенности, незадолго перед родами. Вероятность вирусной трансмиссии при рецидиве у матери значительно ниже. Кроме того, риск первичной инфекции и рецидива HSV возрастает во время беременности. Большинство матерей, передающих HSV детям, не имеют симптомов на момент родов. Это указывает на важность серологического скрининга матерей во время беременности. Диагностика врожденных заболеваний Токсоплазмоз: так как признаки и симптомы токсоплазмоза неспецифические и большинство случаев субклинические, диагностика токсоплазмоза в основном базируется на серологических тестах, таких как цветной тест Сейбина-Фельдмана, тест агглютинации, иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA) и иммуноблоты. Тест Сейбина-Фельдмана, предложенный в 1948, остается золотым стандартом в диагностике токсоплазмоза из-за его очень высокой чувствительности. Однако тест сложен в исполнении и достаточно дорогой, и в настоящее время достаточно редко используется, в основном в качестве референсного метода. Проспективное серологическое тестирование особенно рекомендуется людям с риском тяжелых последствий инфекции T. gondii, например, серонегативным беременным женщинам или серонегативным женщинам, планирующим беременность. Так как риск трансплацентарного инфицирования плода обычно ограничен только группой серонегативных женщин, у которых выявляется первичная инфекция в период беременности, оценка иммунного статуса T. gondii является очень важной. IgG-антитела к T. gondii могут продуцироваться на протяжении всей жизни после первичной инфекции. Выявление IgG-антител в образце с любым титром подтверждает только то, что пациент когда-либо в недавнем или далеком прошлом был инфицирован. Таким образом, единственным диагностическим критерием острого токсоплазмоза является авидность, т.е. эффективность связывания IgG-антител с T. gondii, присутствующими в сыворотке. Такой анализ основан на цикле созревания IgG-антител. Ранние IgG-антитела при острой инфекции обладают низкой эффективностью связывания, иначе говоря, низкой авидностью, тогда как антитела, продуцируемые при прошедшей инфекции, имеют высокую эффективность связывания, т.е. высокую авидность. IgM-антитела выявляются у людей с недавней инфекцией. Однако, они могут персистировать в течение года или дольше. Острая инфекция T. gondii редко сопровождается очень низким или невыявляемым уровнем IgM-антител (так называемые IgM низко- / не-респонденты). Кроме того, при адекватной лекарственной терапии уже на ранней стадии инфекции, титры антител, особенно титры IgM-антител, быстро снижаются. Ложноположительные реакции могут выявляться у людей с хронической инфекцией или у некоторых пациентов, никогда не инфицированных T. gondii. У таких людей результат тестирования на специфические IgG-антитела будет отрицательным. Диагностические показатели при использовании метода MIKROGEN recomLine TORCH Screening IgG основаны на стратегии использования двух антигенов. На первом этапе, общий иммунный статус подтверждается с использованием основного антигенного бэнда, состоящего из антигена цельного лизата клеток T. gondii. Полученная информация корректируется дополнительным антигенным бэндом, содержащим специфический рекомбинантный антиген T. gondii p30. Так как IgG-антительный ответ на этот антиген обычно выявляется не ранее чем через 3 месяца после первичной инфекции, p30 антиген позволяет установить время инфекции. Однако, так как IgG-антительный ответ на p30 может присутствовать не у всех инфицированных людей, или он может снижаться или исчезнуть со временем, отсутствие специфического сигнала p30 не может быть использовано для диагностики острого токсоплазмоза. Диагностическая значимость метода MIKROGEN recomLine TORCH Screening IgG для тоскоплазмоза дополняется методом MIKROGEN recomLine TORCH Screening IgM. T. Gondii -специфический антигенный бэнд представляет собой композицию высокоочищенного лизата целых клеток и раннего антигена ROP1c. Определяемые уровни IgM антител, специфических к T. gondii, особенно в отсутствии специфических IgG, могут указывать на первичную или недавнюю инфекцию, в этих случаях всегда необходимо повторить анализ и подтвердить результат с использованием образца, взятого позже (на 10-14 дней позже) или с помощью подтверждающего теста. Для прояснения и подтверждения неясных или диагностически очевидных случаев токсоплазмоза, методы MIKROGEN recomLine Toxoplasma IgG [авидность] и recomLine Toxoplasma IgM могут служить полезными диагностическими инструментами. Эти тест-системы основаны на использовании высокоспецифичных рекомбинантных антигенов и позволяют выполнять всестороннюю диагностику, основанную на параллельном определении специфических IgG- и IgM-антител, а также авидности IgG антител. Краснуха: клинический диагноз краснухи должен во всех случаях быть подтвержден данными серологического анализа, так как неспецифические симптомы сыпи и артрита могут быть вызваны многими другими агентами. Серологическая диагностика инфекции краснухи может быть признана только в сочетании с клинической историей, эпидемиологическими данными и другими данными. Существуют четкие различия между рутинной диагностикой (т.е. рутинным скринингом) и диагностикой по медицинским показаниям. Стандартная диагностическая процедура выявления краснухи представлена тестом ингибирования гемагглютинации (HAIT). В отсутствии клинических симптомов титры HAIT от 1:32 и выше рассматриваются как защитные против инфекции краснухи (т.е. указывают на наличие иммунитета). Однако тест HAIT не позволяет различать IgG- и IgM-антитела к краснухе. Вследствие чего такой результат может наблюдаться и при острой инфекции краснухи, характеризующейся высокими титрами IgM. В качестве альтернативы или дополнительного метода для оценки защитного иммунитета против вируса краснухи может быть использован ИФА-метод выявления специфических IgG-антител к краснухе. Согласно рекомендациям Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ, WHO), титр IgG-антител ≥15 МЕ/мл рассматривается как показатель наличия защитного иммунитета. В рутинной диагностике концентрация IgG-антител к краснухе в диапазоне 15 - 25 МЕ/мл рассматривается как пограничная, это означает, что защитный иммунитет не может быть подтвержден. Повышенный уровень титра IgM-антител к краснухе может указывать на первичную инфекцию. Антитела класса IgM могут выявляться в течение 1-2 месяцев после первичной инфекции, но могут и персистировать на определяемом уровне до одного года. Кроме того, определяемые уровни IgM-антител к краснухе могут присутствовать после реинфекции вирусом краснухи или после вакцинации. Ложноположительные результаты могут быть вызваны перекрестной реактивностью в результате поликлональной стимуляции вирусом Эпштейна-Барр, ЦМВ или инфекции парвовирусом B19. Следовательно, выявляемый титр IgM-антител к краснухе сам по себе не может точно предсказать риск врожденной инфекции. Результаты анализа, указывающие на присутствие IgM-антител к краснухе, всегда должны быть подтверждены; анализ необходимо повторить через 4-12 недель с использованием образцов, взятых позднее (контроль в мониторинге) или образцы должны быть проанализированы другим методом. Так как первичная инфекция краснухи в период беременности может привести к тяжелым нарушениям у плода, подтверждающий анализ является особенно важным в период беременности. Кроме обследования матери в специализированных лабораториях необходимо выполнять пренатальную диагностику: исследование образца крови плода или ПЦР-анализ. Метод MIKROGEN recomLine TORCH Screening IgG позволяет выполнять оценку иммунного статуса (в результате вакцинации или прошедшей инфекции) против краснухи. Дополнительный бэнд, специфический к вирусу краснухи (бэнд вакцинации краснухи; обозначенный как "Ru-co" на тест-стрипе IgG), соответствует титру IgG-антител ≥15 МЕд/мл. Интенсивность основного бэнда краснухи пропорциональна активности IgG-антител к краснухе, присутствующих в образце. Интерпретация сигнала основного бэнда краснухи (состоящего из лизата цельного вируса) выполняется путем сравнения с интенсивностью бэнда вакцинации против краснухи. Диагностическая значимость метода MIKROGEN recomLine TORCH Screening IgG assay усиливается использованием метода MIKROGEN recomLine TORCH Screening IgM. Определяемые уровни IgM-антител к краснухе, особенно в отсутствии IgG-антител к краснухе, могут указывать на первичную или недавнюю инфекцию, и в этих случаях тест должен быть повторен или подтвержден с использованием образца, взятого позднее (на 10-14 дней позднее) или с помощью подтверждающего теста. Для прояснения и подтверждения неясных или диагностически очевидных случаев краснухи метод MIKROGEN recomBlot Rubella IgG может служить полезными диагностическим инструментом. Эта тест-система основана на использовании высокоспецифичных рекомбинантных антигенов: димерной формы структурных белков вируса краснухи E1-E2, капсидного белка C. Положительный результат с бэндом E2 позволяет исключить первичную инфекцию в течение последних трех месяцев. Цитомегаловирусная инфекция: используемые в настоящее время методы диагностики инфекции ЦМВ основаны либо на выявлении специфических антител к ЦМВ, выявлении вирусной ДНК (ПЦР), или на выявлении вирусных компонентов (выделении вирусных частиц или антигена pp65). Выбор метода в каждом конкретном случае определяется клиническими показаниями. Выбранные метод зависит от имеющихся клинических данных или специфики вопроса в каждом случае. Серологические исследования рекомендованы для людей групп риска и особенно необходимы в следующих случаях: • Выявление первичной инфекции у пациентов с нарушениями иммунной системы, • Определение иммунного статуса доноров и реципиентов при трансплантации, • Определение иммунного статуса доноров крови, • Диагностика во время беременности. Стандартный скрининг на антитела, специфические к ЦМВ, обычно выполняется методом ИФА (ELISA). Имеющиеся ИФА-методы предоставляют возможность общей оценки гуморального иммунного ответа на вирус. Однако, точная дифференциальная диагностика первичной инфекции или прошедшей инфекции обычно невозможна. Классические серологические исследования на ЦМВ основаны на предположении, что антитела класса IgM продуцируются на протяжении острой и поздней фаз первичной инфекции ЦМВ, тогда как соответствующий IgG-ответ наблюдается в течение длительного периода. Следовательно, определяемые уровни ЦМВ-специфических IgM-антител могут подтверждать предположение об острой инфекции, а наличие IgG-ответа в отсутствии IgM-антител может указывать на инфекцию в далеком прошлом. Однако, ЦМВ-специфические IgM-антитела могут персистировать в течение нескольких месяцев. Кроме того, острая ЦМВ-инфекция изредка может сопровождаться очень низким или неопределяемым уровнем IgM-антител (так называемый низкий IgM-ответ/отсутствие IgM-ответа). Из-за различий индивидуального иммунного ответа и отклонений в серологическом профиле (персистенция, реактивация, или отсутствие ответа), использование классических методов может привести к ошибочным или неправильно интерпретируемым диагностическим находкам. Классические методы диагностики могут быть дополнены определением авидности ЦМВ-специфических IgG-антител. В течение первых недель после первичной инфекции продуцируются антитела с низкой авидностью. Нарастание авидности IgG-антител со временем может быть использовано как диагностический критерий. Диагностика инфекции ЦМВ данным методом MIKROGEN recomLine TORCH Screening IgG основана на стратегии двух антигенов. На первом этапе подтверждается общий иммунологический статус с помощью полосы основного антигена, состоящего из ЦМВ-антигена лизата цельных клеток. Полученная информация уточняется реакцией с дополнительной антигенной полосой, состоящей из ЦМВ-специфического рекомбинантного антигена gB2. IgG-антительный ответ на этот антиген в общем случае определяется не ранее 6-8 недель после первичной инфекции. Однако, так как специфический IgG-ответ на gB2 может отсутствовать у отдельных инфицированных пациентов, или может снизиться или исчезнуть, отсутствие gB2-специфического сигнала не может быть использовано как диагностический критерий острой цитомегаловирусной инфекции. Результаты диагностических исследований методом MIKROGEN recomLine TORCH Screening IgG могут уточняться с помощью метода MIKROGEN recomLine TORCH Screening IgM. Определяемый уровень ЦМВ-специфических IgM-антител, особенно в отсутствии ЦМВ-специфического IgG-ответа, может указывать на первичную или повторную инфекцию, и положительный результат всегда должен быть подтвержден повторным анализом образцов, взятых позднее (на 10-14 дней) или с помощью подтверждающего метода. Для уточнения и подтверждения неясных или диагностически сомнительных результатов исследований на цитомегаловирус могут быть использованы методы MIKROGEN recomBlot ЦМВ IgG [авидность] и recomBlot CMV IgM, предоставляющие достоверную диагностическую информацию. Эти методы основаны на использовании высокоспецифических рекомбинантных антигенов (IE1, p150, CM2, p65, gB1 и gB2) и позволяют выполнять всестороннюю диагностику на основании параллельных определений специфических IgG- и IgM-антител, а также авидности IgG-антител.