Назначение: набор Human PDGF-BB Quantikine ELISA Kit предназначен для количественного определения человеческого тромбоцитарного фактора роста BB (PDGF-BB) в образцах супернатантов клеточных культур, сыворотки, плазмы крови методом иммуноферментного анализа.
Диапазон измерения: 15-2000 пг/мл.
Аналитическая чувствительность: 15 пг/мл.
Приложения теста: человеческие тромбоцитарные факторы роста (PDGF) – общий термин для маленькой группы структурно родственных секретируемых факторов роста. Эти факторы роста широко экспрессируются, имеют дисульфидные связи и представляют продукты 4 отдельных генов, из них 5 называются PDGF, и все принадлежат семейству PDGF/VEGF, суперсемейству белков с цистеиновыми связями. В пределах семейства PDGF существуют два подсемейств, которые характеризуются наличием или отсутствием CUB (C1r/C1s, Urchin EGF-подобный и BMP1-1) домена. Два гена (PDGF-C и –D) содержат CUB-домен, тогда как оставшиеся два гена (PDGF-A и –B) его не содержат. Хотя все 4 продукта гена гомодимеры, образуется также PDGF-AB - гетеродимер с ковалентными связями. Образование гетеродимера является произвольным процессом. Все белки PDGF синтезируются в неактивной проформе, которая подвергается внутриклеточному или внеклеточному протеолитическому процессингу с образованием активной формы, и все PDGFs содержат, по крайней мере, одну изоформу, которая связывает гепарин.
Человеческий PDGF-BB синтезируется в виде предшественника длиной в 241 аминокислотный остаток (аа) и м.м. 35 кДа. Он содержит сигнальную последовательность из 20 аа, N-терминальный продомен из 61 аа, зрелый регион длиной в 109 аа и C-терминальный продомен из 51 аа. Предшественник сначала димеризуется, и затем уже осуществляется двойной процессинг. N-терминальный домен отщепляется первым (позиции 21-81 аа), следом C-терминальный домен (191-241 аа), и затем зрелый регион размером 16-17 кДа (или 29-32 кДа в виде гомодимера). N-терминальное гликозилирование необходимо для соответствующего складывания структуры, но этот участок удаляется перед секрецией. Примечательно, что N-терминальный продомен остается нековалентно связанным со зрелой молекулой после секреции, блокируя любые возможные взаимодействия с PDGF-рецепторами на тех же самых клетках. В этом случае C-терминальный продомен сохраняется, и изоформа м.м. 40 кДа может секретироваться, связываясь с протеогликанами клеточной мембраны. Существует одна изоформа, которая содержит три аминокислотные замены для aa 1-21, она не секретируется и аккумулируется либо в цитоплазме, либо в ядре. Зрелый человеческий PDGF-BB идентичен на 96% и 89% с собачьим и мышиным зрелым PDGF-BB, соответственно. PDGF-BB экспрессируется гепатоцитами и нересорбирующими остеокластами, стимулируя остеобласты и формирование кости. Он также продуцируется тромбоцитами, макрофагами и мастоцитами, и в местах повреждения, стимулируя инфильтрацию нейтрофилами и макрофагами для удаления дебриса, секреции фибробластами нового экстраклеточного матрикса и IGF-I опосредованной реэпителизации.
Существует ряд молекул, прямо или косвенно участвующих в связывании PDGF. Традиционный рецептор(ы) для PDGF – гомо или гетеродимер, образованный из двух трансмембранных рецепторных тирозинкиназ (RTK) типа I м.м. 170-180 kDa, называемые PDGF Ra и PDGF Rβ. В исследованиях in vitro было установлено, что гомодимер aa будет связывать PDGF-AA, -AB, -BB и –CC; а гетеродимер aβ будет связывать PDGF-AB, -BB и –CC; и что гомодимер ββ будет связывать –BB и –DD. Исследования in vivo подтвердили PDGF-AA и –CC действуют через aa, и – BB и –DD действуют через ββ. Другие молекулы, которые участвуют в связывании PDGF, включают: LRP1, который формирует комплекс с PDGF Rβ; FGF R1, который формирует комплекс и с PDGF Rβ и с PDGF Ra; и нейропилин-1, который формирует комплекс с PDGF Ra. PDGF-BB будет также связываться с SorLA/LR11 и с циркулирующим SPARC. Продукты генов PDGF-A и –B также связывают циркулирующий a2 макроглобулин.
PDGF воздействует на многие клетки, особенно мезенхимальные, как митогенный и хемотаксический фактор. PDGF способствует заживлению ран, утолщению слоя интимы (что связано с атеросклерозом) и может участвовать в неопластической трансформации в патогенезе опухоли. Главный источник PDGF в человеческой крови - тромбоциты, где PDGF-AA и -AB запасены в α-гранулах и освобождаются при активации тромбоцитов. В отсутствии активированных тромбоцитов PDGF содержится в небольшом количестве в плазме, и вновь поступающий в плазму PDGF быстро расщепляется.